Оставить свой отзыв
Ваше имя:*
Почта:
Ваше сообщение:*
Код с картинки:*
введите код с картинки
 


* - поля, обязательные для заполнения.
RU EN

Метод определения резус-фактора

Наборы реагентов предназначены для определения резус-фактора плода по крови резус-отрицательной беременной женщины методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.
Наборы состоят из нескольких компонентов, необходимых для проведения ПЦР в реальном времени:
  • растворы с праймерами и зондами к гену резус-фактора RHD-1 и RHD-2 (амплифицируются два экзона, что повышает надёжность исследования)
  • растворы с праймерами и зондами к гену GAPDH (контроль правильного выделения ДНК)
  • TAQ-полимераза (с технологией «горячий старт» - повышает специфичность анализа)
  • Положительный контрольный образец (контроль работоспособности системы)
  • Отрицательный контрольный образец (контроль ложно-положительных реакций)

Отличие наборов «ДНК-резус ребенка плюс» заключается в том, что в этих наборах полимераза включена в состав буфера, что делает работу лаборанта более удобной, снижая до минимума возможные ошибки ручного раскапывания реагентов.

Исследование проводится в несколько этапов:

1. Взятие крови и выделение плазмы. Исследуемым материалом для проведения анализа является венозная кровь беременной резус-отрицательной женщины. Кровь сдаётся натощак, собирается в пробирку с антикоагулянтом EDTA в количестве 7-10 мл. Закрытую пробирку с кровью несколько раз переворачивают. В течение 24 ч с момента взятия крови следует отобрать плазму и перенести в новую пробирку. Плазма должна доставляться в лабораторию в течение 16-24 ч после взятия материала (рекомендуется максимально ускорять доставку и осуществлять ее на льду или в термоконтейнерах при температуре минус 20°С).

2. Выделение ДНК. Проводится колоночно-адсорбционным методом с использованием рекомендуемых комплектов наборов, предназначенных для выделения циркулирующих нуклеиновых кислот из биологических жидкостей, согласно методике производителя.

3. Проведение амплификации с детекцией в режиме реального времени. Пробоподготовка – стандартная для проведения ПЦР. Смешивание компонентов реакции производится согласно расчетным таблицам из инструкции к наборам. Конечный объём реакции – 20 мкл. Подготавливаются реакции для непосредственного выявления гена резус-фактора в исследуемой пробе, а также контрольные реакции, подтверждающие правильность выполнения исследования. Для проведения реакции подходят амплификаторы как роторного типа, например, «Rotor-Gene» 3000 или 6000 («Corbett Research», Австралия) так и планшетного типа, например, «iQ5» («BioRad», США), «Mx3000P» («Stratagene», США) или эквивалентные. Детекция сигнала производится на канале FAM/Green. Реакция занимает от 1,5 до 2 часов (в зависимости от скорости изменения температуры амплификатором)

4. Регистрация и учёт результатов анализа. Регистрацию результатов проводят с помощью программного обеспечения используемого прибора. Анализируют кривые накопления флуоресцентного сигнала по одному каналу. Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, что определяет наличие (или отсутствие) для данной пробы ДНК значения порогового цикла «Ct». Интерпретация проводится в соответствии с таблицей, приведённой в инструкции к наборам.

Таким образом, для правильного определения резус-фактора плода по крови беременной женщины необходимо соблюдение следующих условий:

1. Срок беременности – с 10 недель.

2. Правильное обращение с плазмой, выделение ДНК в максимально быстрые сроки.

3. Выделение ДНК с использованием надёжной технологии.

4. Организация работы в ПЦР-лаборатории согласно действующим национальным нормам.

5. Чёткое следование инструкции.